分子生物学基本实验操作
1. RNAaseA使用
简介：是一种内切核糖核酸酶，在C和U残基位置特异性降解单链RNA，该酶可以切割核苷酸间的磷酸二酯键。产生的2‘，3’环磷酸可以水解为相应的3’核苷磷酸盐。应用于质粒和基因组DNA制备时除去RNA，重组蛋白质制备过程中，除去溶液中的RNA。
使用前准备：使用之前应沸水浴15min，彻底去除DNAase活性。常用浓度10mg/ml。
使用方法：往样品中加入1/100V的RNAase，37℃保温1h，反应终止：采用酚氯仿法抽提去除该酶，然后乙醇沉淀得到纯净的原样品
2. DNA(酶切产物)浓缩
加1/10体积的3M醋酸钠（灭菌，PH5.2左右）（加入醋酸钠后一定要混匀，然后再加无水乙醇，）、2.5倍体积的无水乙醇（预冷），-20℃30min，12000r/min,离心10min，弃上清，加1ml70%乙醇悬浮沉淀并12000r/min离心10min，弃上清，再略微离心吸出残余的乙醇，干燥，加适量无菌水溶解。
3. 酶制剂的存放及取用
存放：
①酶制剂应最好放在一个冰盒里，盒内有放离心管的小孔，这样构造一个小环境能够防止因频繁开冰箱门而造成酶制剂周围温度升高从而造成酶活力下降。
②分装小份保存。
取用：
酶在任何反应中必须最后加，故只有使用时才能将其拿出冰箱，不可提前取出。
4.无菌操作技术
A消毒方法。在对物品消毒时应首先进行包装封口，防止灭菌后再次落入微生物。常用包装材料有锡箔纸（干热灭菌用）、封口膜、报纸（尽量别带颜色）等。
（1）高温湿热灭菌。一般要求为1.034×105Pa、121.3℃，20min。有些培养基如以葡萄糖为碳源的则需要115℃，15min。对于组织培养过程中用到的培养基、激素、枪头、烧杯、培养皿、镊子、剪刀等包装后可以在灭菌锅中采用此方法灭菌。
（2）化学消毒。常用的试剂为75%酒精、新洁尔灭（稀释使用）、2%次氯酸钠、升汞。如对于棉球必须事先用75%酒精浸泡数分钟后使用，以及超净台面也采用75%酒精擦拭消毒。外植体消毒也常采用化学试剂法。
（3）过滤除菌。对于 不能耐受高温的相关激素及抗生素等应采用过滤除菌方法。过滤除菌常采用的仪器有Zeiss滤器、以推动注射器为压力的微孔滤膜滤器。常用的滤膜一般有0.22um和0.45um，均为一次性使用，滤器及滤膜均需要高温湿热灭菌后使用。
注：0.22um是最小细菌的直径，在此滤膜下只有病毒才能滤过。
（4）紫外线灭菌。室内空间、超净工作台空间、实验服等采用紫外线灭菌，灭菌时间30min。
（5）干热消毒灭菌。对于一些金属器械、玻璃器皿、搪瓷器皿等实验要求很严格时应采用干热灭菌方法。一般要求为140℃，3~4h，若达到无RNA酶的要求，则需要200℃，3h。此种方法在常规组织培养过程中基本不用。
B无菌操作。
(1)将需要紫外灭菌的物品放置超净工作台内，实验服张开尤其袖口处，放室内紫外灯下。
(2) 在接种前30min打开室内空间紫外灯及超净台内紫外灯进行灭菌30min；
(3)操作者操作前必须将指甲剪去，洗净双手，穿好刚才紫外灭菌的实验服；
(4)灭菌结束后，略微打开一下挡板，并打开超净台风机吹1min（此时实验人员远离，吹出的气体为臭氧，对身体不利）。结束后，上工作台，点燃酒精灯并用酒精棉球擦拭双手，特别是指甲部位及手腕，然后擦拭工作台面；
(5)用酒精棉球擦拭接种工具，再将镊子和剪子从头至尾过火一遍，然后反复过火进行操作部位，并对培养皿要过火除菌；
(6)接种时，操作者双手不能离开工作台，不能说话、走动、咳嗽和接电话等；
(7)接种完毕后要清理干净工作台，并用紫外灯灭菌30min。若连续接种，每5天要大强度灭菌一次。
注：紫外线灭菌的原理是利用辐射因子灭菌，细菌吸收紫外线后，蛋白质和核酸发生结构变化，引起细菌的染色体变异，造成死亡。但紫外线的穿透物质的能力很弱，所以只适于空气和物体表面的灭菌；而且照射距离一般在1.0m左右，故接种室紫外灯不可离地面太高。另外接种室可一用75％的酒精或3％的来苏儿喷雾，使空气中灰尘颗粒沉降，达到进一步灭菌的目的。